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行業(yè)動(dòng)態(tài)

基因擴增PCR的標本制備區進(jìn)行臨床標本的保存

更新日期:2019年6月10日 大字 小字
基因擴增PCR檢測技術(shù)能幫助檢疫人員快速發(fā)現該病毒。PCR實(shí)驗室原則上分為四個(gè)單獨的工作區域:試劑準備區、標本制備區、擴增區、產(chǎn)物分析區。為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區域須嚴格遵循單一方向進(jìn)行,從試劑準備區→標本制備區→擴增區→產(chǎn)物分析區單向流動(dòng)。

基因擴增PCR的標本制備區進(jìn)行臨床標本的保存,核酸提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。 要正確使用加樣器。
由于在加樣操作中可能會(huì )發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動(dòng)??赏ㄟ^(guò)在本區內設立正壓條件避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測核酸后,須蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在傳染危險性的材料,須有明確的樣本處理和滅活程序。
用過(guò)的加樣器吸頭須放入專(zhuān)門(mén)的消毒容器內。實(shí)驗室桌椅表面每次工作后都要清潔,實(shí)驗材料(原始血標本、血清標本、提取中的標本與試劑的混合液等)如出現外濺,則須分別處理并作出記錄。 對實(shí)驗臺適當的紫外照射(254nm波長(cháng),與工作臺面近距離)適合于滅活去污染。
可移動(dòng)紫外線(xiàn)管燈可用來(lái)確保工作后對實(shí)驗臺面的充分照射。 樣本處理對核酸擴增有很大影響,須使用有效的核酸提取方法,可在開(kāi)展臨床標本檢測前對提取方法進(jìn)行評價(jià)。

用于RNA擴增檢測樣本制備好以后,應立即進(jìn)行CDNA合成,因為cDNA鏈較RNA穩定,保存相對容易。為保證逆轉錄反應的需要,應在標本制備區設置一個(gè)以上的溫育裝置。
CDNA合成的理想溫度依所使用的酶而定,傾向于使用一步法:
即使用在擴增反應緩沖液條件下具有逆轉錄活性的熱穩定的DNA聚合酶進(jìn)行逆轉錄,其較cDNA合成后再開(kāi)蓋以調節緩沖液或加入聚合酶進(jìn)行擴增發(fā)生污染的可能性降低。待測RNA的CDNA拷貝須保存在標本制備區,不得在本區對樣本進(jìn)行基因擴增PCR。
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