基因擴增PCR主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平等。加樣器、天平除了要專(zhuān)用外，還應有定期校準。試劑分裝應在超凈臺中進(jìn)行，擴增反應混合液應使用分子生物學(xué)級的，試劑制備好后應有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。

　　基因擴增PCR的擴增與克隆方法：

　?、僖锏男蛄袘挥诨蚪MDNA的高度保守區，且與非擴增區無(wú)同源序列。這樣可以減少引物與基因組的非特異性結合，提高反應的特異性

　?、谝镩L(cháng)度：15－40bp為宜。引物過(guò)短或過(guò)長(cháng)均可使反應的特異性下降。

　?、垡锏膲A基盡可能隨機發(fā)布，避免出現數個(gè)嘌呤或嘧啶的連續排列，G+C堿基的含量在40%－75%之間。

　?、芤飪炔繎苊庑纬啥壗Y構，特別是引物的末端應避免有回文結構。

　?、荻€(gè)引物不應有互補序列，特別是3’端應避免互補，以免形成“引物二聚體”，浪費引物。

　?、抟?’末端堿基無(wú)嚴格限制，在與模板DNA結合的引物長(cháng)度足夠的條件下，其5’端堿基可不與模板DNA互補而呈游離狀態(tài)，因此可在引物5’端加上限制性?xún)惹忻肝稽c(diǎn)、啟動(dòng)子序列或其它序列等以便于PCR產(chǎn)物的分析克隆等，引物的5’端至多可加10個(gè)堿基而對PCR反應無(wú)影響。

　　基因擴增PCR的使用建議：

　　1、使用本制品時(shí)務(wù)必將Buffer反復混勻后再加，避免因組分不一導致結果差異；

　　2、配置和分裝反應液時(shí)請一定使用新的（無(wú)污染的）噴頭以避免污染；

　　3、如擴增條帶多，可適當添加酶和dNTPs；

　　4、當多重PCR擴增產(chǎn)物的長(cháng)度均在1kb以?xún)葧r(shí)，使用3%～4％濃度的Agarosegel進(jìn)行電泳分離效果。