當我們獲得了Micro Drop超微量分光光度計檢測結果后，對光譜的正確分析至關(guān)重要。
1. A260nm——核酸更高吸收峰的吸收波長(cháng)。
2. A280nm——蛋白更高吸收峰的吸收波長(cháng)。
3. A230nm——是碳水化合物更高吸收峰的吸收波長(cháng)。
4. A340nm——是基線(xiàn)校準波長(cháng)，為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0。如果不是，表明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A340一般是0。
● A230產(chǎn)生負值主要是由于在很低 DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導致的。在下一個(gè)測定中，需要降低樣品的稀釋度，A230的負值會(huì )被校正。
● A260/A280比值可進(jìn)行核酸樣品純度評估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純 RNA的A260/A280比值為2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類(lèi)物質(zhì)的污染，需要純化樣品。
● A260/A230比值可進(jìn)行核酸樣品純度評估：純 DNA和RNA的A260/A230比值為 1.8 – 2.2。若比值小于1.8表明樣品被碳水化合物（糖類(lèi)）、鹽類(lèi)或有機溶劑污染，需要純化樣品。當 260/230<1 時(shí)，通常只有兩種情況。一是胍鹽污染，二是蛋白污染。
● 苯酚/ Trizol萃取——殘留試劑污染可以通過(guò)220至240nm之間的異常光譜以及260至280nm區域的偏移來(lái)表示。加氯仿離心后取上清的時(shí)候千萬(wàn)不要貪多，那樣就很容易被蛋白污染。
● 純化柱提取——殘留胍可能有助于230nm附近的峰值和從230nm到240nm的波谷偏移。
● 磁珠法提取——殘余珠可能會(huì )導致光散射，并導致異常光譜。
1. A260/A280、A260/A230比值受溶液酸堿度及離子強度的影響，如酸溶液會(huì )使A260/A280比值降低，低離子強度和低 pH 溶液會(huì )增加 280 nm 處的光吸收值。因此必須確?？瞻讬z測和溶解樣品所用Buffer的離子濃度和pH值一致。
2. 濃度接近2 ng/μl濃度的樣品可能會(huì )導致不可靠的260/280和/或260/230的比值。
3. 樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在會(huì )干擾測試效果。樣品的濃度不能過(guò)低，或者過(guò)高（超過(guò)光度計的測試范圍）。
4. 樣品混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值；混合液不能存在氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數漂移劇烈。樣品混合不均勻會(huì )直接導致檢測不確定，重復性低。
5. 樣品檢測上樣量不能太少，必須能夠保證能后連接上下兩根光纖形成光柱，從而使得檢測正常進(jìn)行。
6. 樣品臺清潔，在檢測前，檢測后以及連續使用儀器30分鐘后均需要對上下接觸樣品的部位用雙蒸水或純水擦拭。
7. 切忌不可用噴壺在樣品臺上噴射，以防液體液體進(jìn)入儀器內部造成損壞。
8. 切忌不可用洗滌劑或異丙醇清潔基座。
9. 儀器放置位置應當遠離通風(fēng)口，以免液滴蒸發(fā)太快導致濃度讀數偏大。