分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。由于核酸，蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量樣本量很小，于是超微量分光光度計應運而生。超微量分光光度計近年來(lái)已經(jīng)替換普通的分光光度計成為分子生物學(xué)實(shí)驗室的新寵，廣泛應用于生命科學(xué)實(shí)驗室蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)等領(lǐng)域。
1
超微量分光光度計與傳統分光光度計相比，前者具備的獨特優(yōu)點(diǎn)在于：
(1)所需樣品體積小，僅需0.5—2μl；
(2)不需要比色皿，用移液槍直接將樣品滴加到檢測平臺上，測量時(shí)樣品自動(dòng)形成液柱，檢測完成后只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可，避免了因為比色皿清洗不凈帶來(lái)的交叉污染；
(3)一般具有多個(gè)光程(電機控制自動(dòng)選擇)【BIO-DL MicroDrop基座模式下光程1.0 mm、0.2 mm、0.1 mm 和 0.05 mm自動(dòng)調整】，而傳統分光光度計的光程為10 mm，超微量分光光度計樣品無(wú)需稀釋?zhuān)瑴y量范圍可達到常規分光光度計的50倍【BIO-DL MicroDrop基座模式下dsDNA檢測范圍：2~15000ng/μl】；
(4)氙氣閃光燈為燈源，代替了氘燈(紫外)和鎢燈(可見(jiàn))，使用壽命更長(cháng)；
(5)不需要預熱，可隨時(shí)檢測，檢測時(shí)間短【BIO-DL MicroDrop＜5秒】；
(6)顯示吸光度值的同時(shí)，程序直接給出濃度值(核酸、蛋白和熒光染料)；
(7)占據實(shí)驗室空間體積比傳統分光光度計小很多【BIO-DL MicroDrop重量：2.1kg】。
2
超微量分光光度計不僅涵蓋了可見(jiàn)光分光光度計的功能而且也可以進(jìn)行紫外分光光度計的應用，更常用以下幾方面：
核酸的定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率更高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈DNA、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的更高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸，事先要選擇對應消光因子。如：1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度，分光光度計顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類(lèi)物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
UV-VIS常規可見(jiàn)-紫外檢測
全波長(cháng)超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見(jiàn)分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。更多可以同時(shí)指定檢測40個(gè)波長(cháng)下的吸光值并把數據顯示在報告中。
蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長(cháng)，直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過(guò)程非常簡(jiǎn)單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來(lái)說(shuō)，速度快，操作簡(jiǎn)單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎是蛋白質(zhì)構成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨基酸數目直接相關(guān)，從而反應蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry等幾種方法。
Lowry法：以更早期的Biuret反應為基礎，并有所改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2+反應，產(chǎn)生藍色的反應物。但是與Biuret相比，Lowry法敏感性更高。缺點(diǎn)是需要順序加入幾種不同的反應試劑;反應需要的時(shí)間較長(cháng);容易受到非蛋白物質(zhì)的影響;含EDTA，Tritonx-100，ammoniasulfate等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninineacidassay)法：這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應產(chǎn)生Cu+，后者與BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波長(cháng)。此化合物與蛋白濃度的線(xiàn)性關(guān)系更強，反應后形成的化合物非常穩定。相對于Lowry法，操作簡(jiǎn)單，敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質(zhì)之間以及去污劑的干擾。
Bradford法：這種方法的原理是蛋白質(zhì)與考馬斯亮蘭結合反應，產(chǎn)生的有色化合物吸收峰595nm。其更大的特點(diǎn)是，敏感度好，是Lowry和BCA兩種測試方法的2倍；操作更簡(jiǎn)單，速度更快；只需要一種反應試劑；化合物可以穩定1小時(shí)，方便結果；而且與一系列干擾Lowry，BCA反應的還原劑(如DTT，巰基乙醇)相容。但是對于去污劑依然是敏感的。更主要的缺點(diǎn)是不同的標準品會(huì )導致同一樣品的結果差異較大，無(wú)可比性。
細菌細胞密度(OD600)
實(shí)驗室確定細菌生長(cháng)密度和生長(cháng)期，多根據經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長(cháng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗，需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長(cháng)的標準方法。
3
超微量分光光度計使用時(shí)注意小貼士：
（1）測量前將樣品中度混勻（可采用震蕩器或用手指彈震管底）
（2）移液器吸頭插入液面下吸取樣品，可避免吸入氣泡；TIP頭貼著(zhù)下光纖表面打出樣品，且只按到移液器第一擋盡頭，第二擋不要按，可以避免吹出氣泡到樣品中。
（3）每次測量完畢后，用蒸餾水清潔上下光纖端面，這樣可以更好地保證下一次測量的準確性（主要針對超高濃度樣品，一般樣品無(wú)此要求）。
（4）每次做空白檢測前一定要先用水清潔上下光纖表面，可保證空白檢測準確。
（5）每次測量的核酸樣品量建議為1-2微升,蛋白樣品建議2微升。 過(guò)少可能無(wú)法形成水柱，過(guò)多可能溢出。
（6）加樣后盡快測量，以防蒸發(fā)濃縮以及灰塵落入，已加樣品不能多次檢測，如需重測需重新滴加同一樣品。
（7）儀器避免陽(yáng)光直射，避免強風(fēng)吹拂，以避免蒸發(fā)。
（8）連續測量一段時(shí)間后擦凈樣品，用水清潔上下光纖表面，然后用水或緩沖液進(jìn)行重新空白后再檢測。
（9）清潔光纖端面（上樣基座）時(shí)必須用潔凈質(zhì)軟的實(shí)驗室用紙（擦鏡紙等）進(jìn)行輕輕擦拭。
（10）儀器不用時(shí)，將上臂放下，可以防止灰塵。
4
※ 超微量分光光度計新晉小生——MicroDrop簡(jiǎn)介
一機多用：既可使用超微量基座（下圖上），也可使用常規比色皿（下圖下），想怎么測就怎么測！
開(kāi)機即用：交貨后即可使用 – 安裝時(shí)不需要進(jìn)行任何調節。只需開(kāi)啟電源就能進(jìn)行測量！
上樣量少：上樣范圍0.5μl-2μl，節約珍貴的樣本。再也不用擔心樣品不夠用啦！
無(wú)線(xiàn)連接：無(wú)需數據線(xiàn)連接電腦，從此告別雜亂的數據連接線(xiàn)，儀器可自發(fā)WiFi信號。
全光譜范圍：可檢測185-910nm波長(cháng)下樣本的吸光值，檢測范圍廣，基座模式下因為縮短了光程，檢測濃度范圍非常廣闊，dsDNA:2-15000ng/ul，無(wú)需稀釋樣品，簡(jiǎn)化實(shí)驗流程，減少實(shí)驗誤差，能夠滿(mǎn)足更大部分用戶(hù)的需求。
檢測快速：全波長(cháng)掃描時(shí)間（185—910nm）只需5s，每個(gè)樣品所需要的時(shí)間不到5秒鐘，快速的檢測速度為大量的樣品檢測節省了寶貴時(shí)間。
美觀(guān)簡(jiǎn)約：自重2.1kg，便于移動(dòng)，占地面積小，選配平板無(wú)線(xiàn)連接，平板可隨測隨取，節省實(shí)驗臺面空間。
數據存儲：可自定義選擇數據存儲，不僅能夠自動(dòng)保存檢測原始數據，也可導出Excel數據表，方便計算后續實(shí)驗的加樣量。
