3.劇烈渦旋震蕩10min。
（此步驟可選用研磨儀，頻率：6.5 m/sec ，處理時(shí)間：30S，10個(gè)循環(huán)）
4.14000 rpm離心5 min，轉移上清400 μl到新的1.5 ml的離心管中。
（注意：離心后上清表面可能出現一層雜質(zhì)，避免吸取這些雜質(zhì)，因為這些雜質(zhì)會(huì )影響下游的擴增
5.加入250 μl S3-Cleanup Buffer，立即徹底混勻。
6.14000 rpm離心2 min，轉移全部上清液（約500 μl）到 預分裝板的孔1、7中。
打開(kāi)核酸自動(dòng)提取儀，選擇編輯程序并命名“environmental samples”，按照下表進(jìn)行編輯。
7. 插入磁棒套，運行編輯好的程序，25min左右程序結束，轉移洗脫孔6、12中的DNA至新的離心管-20℃保存或直接進(jìn)入q-PCR 檢測。
q-PCR檢測
1、非洲豬瘟擴增反應液的配制
取出PCR反應液，室溫融化后，取相應份數(反應液20μl/T、Taq 酶0.2μl/T)混勻，然后向各PCR反應管按20μl分裝;再分別加入 5μl抽提好的DNA模板或陰/陽(yáng)性對照，蓋好管蓋;將反應管置于 全自動(dòng)熒光PCR檢測儀中，參照儀器操作說(shuō)明設定陰/陽(yáng)性對照、 待檢樣本參數進(jìn)行PCR反應，記錄好樣本擺放順序。反應體系如下表:
2、 Q-PCR儀的設置反應程序設定
第一步: 94 °C15分鐘;第二步:95 °C10 秒，55 °C 35 秒，45 個(gè)循環(huán); 熒光素設定為FAM在反應程序的第二步55°C末讀取熒光值。
陰陽(yáng)性判斷：
超寬線(xiàn)性范圍，擴增檢測單拷貝，超高靈敏度